革兰氏染色是一种常用于细菌分类和鉴定的染色方法。固定时要避免过热和过长时间,以免使细菌形态和结构改变。
革兰氏染色是一种常用于细菌分类和鉴定的染色方法。其基本步骤包括:
1. 制备菌液:将待染菌株培养于适宜培养基中,使其生长到对数期,然后用生理盐水或缓冲液将菌落取出,制备成悬浮液。
2. 准备玻片:将玻片用火焰消毒或在火焰上烘烤,待冷却后,用标有编号的铅笔或瓷片在玻片上均匀涂布一层细菌悬浮液。
3. 固定:将涂有细菌悬液的玻片,放置在平灰火焰上加热,使细菌固定在玻片上。固定时要避免过热和过长时间,以免使细菌形态和结构改变。
4. 染色:将固定的细菌涂片依次浸入蓝洋红碱性染料,用水洗净。
5. 酒精洗脱:将染过色的固定细菌涂片在盛有95%乙醇的盛器中摇晃,使细菌染色物质洗脱,直至出现洗去颜料后无颜色转移至95%乙醇适宜。
6. 染色后处理:将洗脱后的固定细菌涂片迅速放入水中漂洗。
7. 去水:将漂洗后的固定细菌涂片静置晾干或用吹风机轻微吹干,使其完全干燥。
8. 合成显微镜观察:将干燥的细菌涂片放在显微镜干片上,加入适当润滑油,用100倍油镜进行观察。